TP53是DNA損傷通路中的抑癌基因，是癌癥中最常見的突變基因。TP53編碼p53腫瘤抑制蛋白，這是一種轉(zhuǎn)錄因子，通過誘導(dǎo)下游的抗腫瘤反應(yīng)，如DNA修復(fù)和凋亡，對包括DNA損傷和致癌激活在內(nèi)的細(xì)胞應(yīng)激作出反應(yīng)。

RB1是細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)因子，在各種類型的癌癥中，包括視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤和肺癌，會因突變、缺失或等位基因缺失而失活。RB1功能的喪失不僅導(dǎo)致不受調(diào)控的細(xì)胞分裂和生長，而且還導(dǎo)致阻止細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生的多種機(jī)制的失效。RB1的功能喪失和缺失與肺癌、乳腺癌、前列腺癌和膀胱癌在內(nèi)的許多人類癌癥有關(guān)，同時(shí)RB1和p53的缺失被認(rèn)為構(gòu)成腫瘤起始事件。

前列腺癌(PC)中TP53和RB1缺失會減弱AR信號并增強(qiáng)細(xì)胞增殖，但并不會一致誘導(dǎo)神經(jīng)內(nèi)分泌表型。TP53/RB1缺失的PC對多種癌癥治療出現(xiàn)抵抗，但對PARP和ATR抑制劑有應(yīng)答，可能反映了復(fù)制應(yīng)激增強(qiáng)。

細(xì)胞培養(yǎng)和生成CRISPR修飾克隆、免疫印跡法和免疫組化、生長與富集分析、體內(nèi)LNCaP和LNCaP- DKO研究、qRT-PCR、RNA測序 (RNaseq)、全外顯子組測序和全轉(zhuǎn)錄組RNaseq分析RB1和TP53、UW/FHCRC隊(duì)列數(shù)據(jù)分析、臨床數(shù)據(jù)分析、藥物反應(yīng)分析、患者來源的異種移植研究等。

• TP53和RB1缺失的前列腺癌(PCs)臨床預(yù)后非常差

• TP53/RB1缺失的PC表現(xiàn)出干細(xì)胞樣特征和AR活性的缺失

• TP53/RB1缺失并不會一致促進(jìn)神經(jīng)內(nèi)分泌分化

• TP53/RB1-null 的前列腺癌表現(xiàn)出復(fù)制應(yīng)激，并對PARPi和ATR抑制劑有應(yīng)答

  
  

?TP53和RB1的雙等位基因缺失發(fā)生在轉(zhuǎn)移性前列腺癌表型譜中

為了建立TP53和RB1缺失的mPCs的表型特征，在一項(xiàng)多機(jī)構(gòu)研究(SU2C/PCF隊(duì)列)中評估了444個(gè)經(jīng)轉(zhuǎn)移活檢獲得的去勢抵抗性PC(CRPCs)的全外顯子組序列(WES)數(shù)據(jù)，以根據(jù)TP53和RB1基因組狀態(tài)對腫瘤進(jìn)行分類。剔除了34個(gè)腫瘤細(xì)胞含量估計(jì)＜30%的樣本，剩余410個(gè)腫瘤樣本。

TP53：33%的雙等位基因突變、32%單拷貝丟失或致病突變、34%基因組結(jié)構(gòu)完整(如圖1A)。

RB1：11%的雙等位基因突變、51%單等位基因突變、38%基因組結(jié)構(gòu)完整。RB1突變主要涉及結(jié)構(gòu)改變：在51例發(fā)生雙等位基因RB1突變的腫瘤中，39例發(fā)生雙等位基因拷貝丟失(圖1A)。

（A）TP53和RB1的基因組狀態(tài)：野生型(WT)、純合子缺失(HoL)或雜合子缺失（HeL）

（B）RB1單拷貝和雙等位基因缺失與RB1轉(zhuǎn)錄本水平降低密切相關(guān)(p < 0.0001)

（C）TP53缺失也與較低的TP53轉(zhuǎn)錄水平相關(guān)

（D）SU2C隊(duì)列中34個(gè)NE和AR活性腺癌譜系標(biāo)志物的RNA-seq熱圖將腫瘤分為6個(gè)表型類別，野生型(WT)、純合子缺失(HoL)或雜合子缺失（HeL）

（G-H）CRPCs分布在AR和NE基因表達(dá)的連續(xù)體中，但可以分為六類，定義為：AR + / NE?，AR?/ NE +，AR + / NE +，AR + / NElow，ARlow / NE +和AR?/ NE?

?TP53和RB1的聯(lián)合缺失減弱了AR靶向治療的反應(yīng)，并與不良臨床結(jié)果相關(guān)

（A, a, b）生長試驗(yàn)表明，多個(gè)LNCaPRB1?/?;TP53?/?DKO克隆對恩雜魯胺(ENZ)具有部分抵抗性(n = 3;* p?0.05)。剝奪LNCaP細(xì)胞的雄激素或用ARSi 恩雜魯胺(ENZ)處理細(xì)胞分別使生長減少70%和60%（p＜0.01）。

（D，d）LNCaP(n=8)與LNCaPRB1?/?;TP53?/?的Kaplan-Meier分析(n=10)：LNCaPRB1?/?;TP53?/?異種移植顯示出較更短的去勢抵抗時(shí)間：52天，而LNCaP 為112天(p=0.0001)。TP53的損失適度增強(qiáng)了對SPA(生理雄激素濃度)的抗性，而RB1和TP53的損失組合減弱了SPA對20個(gè)對照細(xì)胞的增殖生長抑制的影響.

(I-K) Kaplan-Meier分析，TP53/RB1 缺失的特征與 (I)從轉(zhuǎn)移性活檢時(shí)間開始的總生存期(OS)， (J)ARSi治療的時(shí)間和(K) 開始ARSi治療后的OS相關(guān)。

?TP53和RB1聯(lián)合缺失促進(jìn)對多種癌癥治療的抵抗

總的來說，TP53/RB1缺陷細(xì)胞對測試的大多數(shù)藥物更耐藥，與TP53和RB1完整細(xì)胞相比，沒有一種藥物對LNCaPRB1?/?;TP53?/?細(xì)胞生長表現(xiàn)出顯著的優(yōu)越或增強(qiáng)效應(yīng)(圖7)。

圖7：TP53和RB1聯(lián)合缺失促進(jìn)對多種癌癥治療的抵抗，但針對DNA復(fù)制應(yīng)激的藥物的治療反應(yīng)增強(qiáng)

(A-G)劑量-反應(yīng)曲線測量LNCaP或LNCaPRB1?/?;TP53?/?DKO生存力對藥物的反應(yīng)：(A)卡鉑;(B)拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑依托泊苷;(C)AURKA抑制劑alisertib;(D)BCL2抑制劑ABT-199;(E)MPT抑制劑替加環(huán)素;(F)PARP抑制劑talazoparib;(G)ATR抑制劑VX-970 (n = 4;* p?0.05)。

*注釋：其他對于前列腺癌治療選擇及預(yù)后有指導(dǎo)意義基因，如AR-V7、TP53、RB1、PTEN等。TP53基因突變是前列腺癌中的常見突變，在中國激素敏感前列腺癌中突變比例是22.3%。同時(shí)常合并其他基因突變；TP53是重要的患者預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物，突變提示患者對阿比特龍或恩扎盧胺治療不敏感。RB1是前列腺癌患者預(yù)后重要的分子標(biāo)志物，RB1缺失與去勢抵抗及神經(jīng)內(nèi)分泌化相關(guān)。

卡巴他賽20mg /m2 +卡鉑 AUC 4mg /mL / min，伴生長因子支持，可以考慮適合侵襲性變異前列腺癌(內(nèi)臟轉(zhuǎn)移，低PSA和腫大病變，高LDH，高CEA，溶骨性骨轉(zhuǎn)移，NEPC組織學(xué))或不利的基因組學(xué)患者(PTEN, TP53和RB1中至少2個(gè)缺陷) 。Corn PG et al.Lancet Oncol 2019;20(10):1432-1443.

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5.Nyquist MD.et al.Combined TP53 and RB1 Loss Promotes Prostate Cancer Resistance to a Spectrum of Therapeutics and Confers Vulnerability to Replication Stress. Cell Rep. 2020 May 26;31(8):107669. doi: 10.1016/j.celrep.2020.107669.

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